一．Pulldown的概念

       在Pulldown實驗中，帶標簽的誘餌蛋白能被特異結(jié)合該標簽的固相親和配基捕獲，形成“次級親和支持物”，用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產(chǎn)物洗脫后，經(jīng)Westernblot驗證或LC-MS/MS，即可證明或鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。

二．Pulldown實驗流程

                                                                          圖1.Pulldown流程示意圖

三．Pulldown實驗方案設計
1、構(gòu)建含His或GST標簽的誘餌蛋白原核表達載體；
2、原核表達誘餌蛋白（我們采用自誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)細菌，能有效降低包涵體的形成）；
3、細菌裂解液過柱，帶標簽的誘餌蛋白被固相化親和配基捕獲，產(chǎn)生“次級親和支持物”；
4、待測樣品裂解液過柱孵育，與誘餌蛋白互作的蛋白被“次級親和支持物”吸附；
5、清洗，離心，去除未結(jié)合的雜蛋白；
6、洗脫，得到誘餌蛋白及其互作蛋白的復合物；
7、如要驗證某蛋白X與誘餌蛋白互作，則將6.所得的蛋白復合物與X蛋白的抗體孵育，做Westernblot驗證即可；
8、如要尋找誘餌蛋白可能的互作蛋白，則需將6.所得的蛋白復合物做LC-MS/MS鑒定；
圖2.Pulldown實驗流程圖

四．生物信息學分析GO注釋統(tǒng)計
 
                                                    
 Pathway分析

五．Pulldown實驗技術(shù)服務內(nèi)容
1、原核表達載體構(gòu)建；
2、融合蛋白的誘導表達與純化；
3、pulldown捕獲互作蛋白；
4、Westernblot驗證或LC-MS/MS鑒定互作蛋白；
5、數(shù)據(jù)檢索、生物信息學分析；
6、結(jié)果分析與報告整理。